1、基因工程的概念：
| 基因工程的別名 | 基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù) |
| 操作環(huán)境 | 生物體外 |
| 操作對(duì)象 | 基因 |
| 操作水平 | DNA分子水平 |
| 基本過(guò)程 | 剪切→拼接→導(dǎo)入→表達(dá) |
| 結(jié)果 | 人類需要的基因產(chǎn)物 |
（1）“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）
①來(lái)源：主要是從原核生物中分離純化出來(lái)的。
②功能：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi)，因此具有專一性。
③結(jié)果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端。
即當(dāng)限制性內(nèi)切酶作用于特定的DNA時(shí)，把這段序列沿著特定的切點(diǎn)切開(kāi)的這個(gè)過(guò)程分兩種情況：
a、沿著中軸線切口（即沿著DNA雙鏈中對(duì)應(yīng)的磷酸二酯鍵）切開(kāi)，得到的就是兩個(gè)平末端；
b、在中軸線的兩端切口切開(kāi)，得到的就是兩個(gè)黏性末端。例如：EcoRⅠ限制性內(nèi)切酶就可以識(shí)別G/AATTC的DNA序列，然后在G和A間切開(kāi)，得到的就是兩個(gè)黏性末端（之間可以根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則重組）限制酶的切口不都是一長(zhǎng)一短的，一長(zhǎng)一短的叫黏性末端，一樣長(zhǎng)的叫平末端�！罢承阅┒恕痹�高中教材中也作“黏性末端”。如圖：
（2）“分子縫合針”——DNA連接酶
| 種類 | E·coli-DNA連接酶 | T4-DNA連接酶 |
| 來(lái)源 | 大腸桿菌 | T4噬菌體 |
| 功能特性 | 只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來(lái) | 縫合兩種末端，但連接平末端之間的效率較低 |
| 相同點(diǎn) | 都縫合磷酸二酯鍵，如圖： | |
（3）“分子運(yùn)輸車”——載體
①載體具備的條件：能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存；具有一至多個(gè)限制酶切點(diǎn)，供外源DNA片段插入；具有標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。
②最常用的載體是質(zhì)粒，它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的、獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外，并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。
③其它載體：噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒
知識(shí)點(diǎn)撥：
1、限制酶識(shí)別的序列的特點(diǎn)：呈現(xiàn)堿基互補(bǔ)對(duì)稱，無(wú)論是奇數(shù)個(gè)堿基還是偶數(shù)個(gè)堿基，都可以找到一條中心軸線，如圖，中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的。如
以中心線為軸，兩側(cè)堿基互補(bǔ)對(duì)稱；
以
為軸，兩側(cè)堿基互補(bǔ)對(duì)稱。
2、獲取目的基因和切割載體時(shí)使用同種限制酶，目的是產(chǎn)生相同的黏性末端。
3、獲取一個(gè)目的基因需限制酶剪切兩次，共產(chǎn)生 4個(gè)黏性末端或平末端。
4、限制酶切割位點(diǎn)的選擇必須保證標(biāo)記基因的完整性，以便于檢測(cè)。
本文來(lái)自：逍遙右腦記憶 http://m.portlandfoamroofing.com/gaozhong/289778.html
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